ישנם סוגים שונים של כרומטוגרפיה כגון כרומטוגרפיה של נייר, כרומטוגרפיה של עמוד, כרומטוגרפיה של גז, כרומטוגרפיה מישורית, כרומטוגרפיה של זיקה, כרומטוגרפיה של שכבה דקה ו כרומטוגרפיה נוזלית.
כרומטוגרפיה נוזלית היא טכניקה המשמשת במעבדות להפרדת מולקולות או יונים מומסים בשלב נוזלי. התהליך החל באמצע המאה ה -19, כאשר שימש בעיקר להפרדת כלורופיל בפיגמנטים צמחיים. מאז פותח תהליך זה על ידי מיכאיל סמיונוביץ 'צבט, בוטנאי רוסי המשתמש בעמודי סידן פחמתי בראשית המאה העשרים.
ישנם סוגים שונים של כרומטוגרפיה כגון כרומטוגרפיה של נייר, כרומטוגרפיה של עמוד, כרומטוגרפיה של גז, כרומטוגרפיה מישורית, כרומטוגרפיה של זיקה, כרומטוגרפיה של שכבה דקה ו כרומטוגרפיה נוזלית. מאמר זה יעמיק בפרטים אודות האחרונים המכונים כיום כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה.
כרומטוגרפיה נוזלית של שלב הפוך
ישנם שני תת-סוגים של תהליך זה המכונים כרומטוגרפיה נוזלית שלב רגיל (NPLC) כאשר השלב הנייח הוא קוטבי יותר מהשלב הנייד. תת-הסוג הנוסף הוא כרומטוגרפיה נוזלית של שלב הפוך (RPLC), כאשר השלב הנייד הוא קוטבי יותר. סוג זה הוא גם טכניקת ההפרדה הנפוצה יותר בימינו.
התהליך של כרומטוגרפיה נוזלית לוקח את הנושא הנוזל שנכפה בעמוד שארוז בחלקיקים בעלי שכבה מונוליטית בצורת כדורית או לא סדירה או נקבובית תוך שימוש בלחץ גבוה מאוד. הוא משתמש במכשירים מורכבים כדי לשאוב את הדגימה הנוזלית דרך משאבה כדי לספק זמן ניתוח מהיר יותר ורזולוציה גבוהה יותר. בעת ביצוע התהליך, חיוני לקבוע באיזה אופן של הפרדה להשתמש. באופן כללי, דגימות שאינן מסיסות במים או שאינן קוטביות משתמשות בשלב הרגיל בעוד שדגימות מסיסות לוקחות את השלב ההפוך. בדרך כלל מומחי מעבדה שוקלים גורמים מסוימים בעת בחירת הממיסים לשימוש. חוזק הממיס מבוסס על קשקשים של סיליקה או אלומינה ומדד הקוטביות של הממיס. הממיסים השלביים ההפוכים הנפוצים ביותרהם מתנול, אצטוניטריל, טטרהידרופוראן ומים. לממיסים אלו צמיגות נמוכה, שקיפות UV והם תערובת זו עם זו.
תת-הסוג הנוסף הוא כרומטוגרפיה נוזלית של שלב הפוך (RPLC), כאשר השלב הנייד הוא קוטבי יותר.
לאחר בחינת איזה סוג להשתמש - כרומטוגרפיה רגילה או הפוך - השלב הבא הוא העמסת התערובת על גבי העמודה ואחריה ממס נוסף. הרכיבים השונים בתערובת הדגימה עוברים בעמודה זו בשיעורים שונים עקב הבדלים בהתנהגות המחיצה שלהם בין שלב הנוזל הנייד לשלב הנייח.
הטמפרטורה משפיעה על הכרומטוגרפיה הנוזלית
מאחר וריאציות בטמפרטורה משפיעות על הכרומטוגרפיה הנוזלית בקנה מידה מינימלי בניגוד לשיטות הכרומטוגרפיה האחרות, נעשה שימוש באליפציות הדרגתיות כדי להפחית את זמן הניתוח ולשפר את הרזולוציה הכוללת של התערובת. עם זאת, לא כל שיטות הכרומטוגרפיה הנוזלית יכולות להשתמש בחישורי שיפוע שכן הפרדות נוזל לנוזל נוטות להיות בעלות תוצאות לא יציבות ואילו אי הכללות בגודל אינן מציגות תוצאות טובות כלל. שיטות החלפת יונים יחד עם ספיחה ושיטות שלב מלוכדות משתמשות באלוצי שיפוע טוב מאוד.
כרומטוגרפיה נוזלית משמשת לרוב בעבודות הכנה למעבדה לטיהור ובידוד של כמה מרכיבים בתערובת. כאשר קיימים עמודים חד פעמיים קטנים, משתמשים בכרומטוגרפיה נוזלית גם בהפרדות עקבות אולטרה כאלה.
כיום, כרומטוגרפיה נוזלית משמשת לרוב כדרך לבדיקת דגימות מים למזהמים מזיקים וזיהום מים. מדענים עדיין מוצאים דרכים כיצד לשפר את התחום הזה, אם כי ההבנה האנושית הנוכחית של טכנולוגיה זו מספיקה כדי למלא את חלקה ביישום החיים האמיתיים.
